Biserica Sf. Ambrozie (Sant’Ambrogio) este literalmente una dintre cele mai vechi structuri din Florenţa, biserica din zilele noastre ocupând locul unde se presupune că însuşi Sf. Ambrozie a stat atunci când a vizitat Florenţa în 393. Având în vedere reputaţia acestui oaspete, o biserică a fost construită mai târziu pe exact acelaşi loc, o biserică prima dată menţionată în 998, deşi există indicaţii cu privire la existenţa unui stabiliment religios cu mult înainte de secolul al X-lea. Florentinii iubesc această biserică în principiu datorită presupusului episod miraculos despre care se spune că a avut loc în 1230 când vinul care a rămas din ziua anterioară într-un potir s-a transformat în sânge.
Chiar în locul în care în care s-a petrecut acest episod a fost construită mai târziu Capela Miracolului (Cappella del Miracolo) cu un tabernacol de marmură proiectat de Mino da Fiesole (la sfârşitul secolului al XV-lea). Lăsând toate acestea la o parte, biserica este valoroasă şi în ceea ce priveşte inventarul său artistic la care au contribuit destule figuri notabile. Filippo Lippi, Sandro Botticelli, Masaccio şi maestrul său Masolino, suspomenitul Mino da Fiesole, Fra Bartolomeo, Niccolo Gerini, Lorenzo di Bicci, Giovanni della Robbia şi alţii au participat la patrimoniul artistic al bisericii cu cea mai mare măiestrie a lor. Valoarea unor astfel de lucrări a fost recunoscută prin faptul că unele dintre ele – precum retablul lui Filippo Lippi ce îl descrie pe Sf. Ambrozie şi scena Încoronării, St. Ana a lui Masolino şi Masaccio – au fost mutate la faimoasa Galerie Uffizi. Turiştii interesaţi de opera şi viaţa lui Mino sa Fiesole, Andrea Verrocchio, Simone Pollaiolo supranumit Il Cronaca, şi Francesco Granacci (prieten apropiat al lui Michelangelo) ar trebui să reţină că toţi aceştia sunt îngropaţi aici.